Aquisição SWATH, A Garantia de Que Nada Será Perdido
Aquisição SWATH em um sistema SCIEX TripleTO® tornou-se rapidamente uma das principais estratégias de aquisição de espectrometria de massas para identificação e quantificação de compostos em amostras complexas. Nenhuma outra técnica pode fazer o que a SWATH pode fazer. A SWATH é a única técnica de aquisição independente de dados (DIA) que permite a detecção e quantificação abrangentes de praticamente todos os compostos detectáveis em uma amostra (MS/MSALL). Isso proporciona confiança em seus resultados quantitativos e praticamente elimina o risco de perder um alguma informação relevante. A estratégia de aquisição SWATH só pode ser alcançada através da potência e velocidade da tecnologia SCIEX TripleTOF® e QTOF. Se não é SCIEX, não é SWATH.
SWATH é uma grande vantagem, permitindo extrair o máximo de informação dos seus dados.
Dr. Ruedi Aebersold, Instituto Biológico de Sistemas Moleculares, ETH Zurique, e Universidade de Zurique, Suiça
Solicite uma Cotação
Solicite mais informações
Request Free Trial
Sem medo de perder algum analito importante
Reduza o risco de perder informações críticas da sua amostra, por meio de aquisição de dados independente e abrangente, para entregar dados confiáveis que seus experimentos exigem.
Aquisição SWATH é um modo de análise independente de dados que combina sensibilidade e alta velocidade de aquisição por MS/MS permitido apenas pelos sistemas SCIEX TripleTOF e QTOF. Assim, cada analito detectável na sua amostra é fragmentado – o verdadeiro análise de MS/MSALL. Como o próprio nome sugere, você tem o registro completo de MS e MS/MS de cada composto presente sem a necessidade de repetição de análise da sua amostr.
Análise dependende de dados vs. Análise independente de dado
Como o SWATH é diferente? Nós vamos te explicar.
Análise dependente de dados (DDA):
Durante uma análise por LC-MS, há muitos analitos que eluem da sua coluna ao longo do tempo e são detectados pelo espectrômetro de massas. Na aquisição dependente de dados, um espectro MS é coletado em uma ampla faixa m/z, e os picos do analito eluidos são detectados e classificados por intensidade de forma decrescente. A aquisição do modo MS/MS é então acionada para estes analitos, começando pelos íons mais intensos. Isso é repetido várias vezes durante a corrida cromatográfica. No modo DDA a janela de isolamento de Q1 é usada para enviar apenas íons de uma m/z específica para análise de MS/MS. Assim, o DDA tem uma limitação crítica: quando há muitos analitos eluídos ao mesmo tempo de intensidades variadas, existe um risco de analitos pouco intensos não serem detectados no espectro original de MS ou não atendem o críterio de DDA otimizado, isso impossibilita a aquisição de dados MS/MS para alguns íons. Isso cria lacunas nos seus dados por alguma informação eventualmente poderá ser perdida.
- Aquisição SWATH (Análise Independente de Dados (DIA)):
Na aquisição por SWATH, o espectrômetro de massas não precisa de uma detecção inicial de dados no modo MS para realizar análises por MS/MS. O espectrômetro de massas usa janelas de isolamento amplas em Q1 que segue sucessivamente ao longo de toda uma faixa de massas definida pelo método, coletando MS/MS de todos os analitos presentes. Toda a extensão da faixa de massas do método é realizado em curtos ciclos de tempo (compatíveis com tempos de eluição do LC) permitindo assim a informações de MS e MS/MS de tudo que é detectável na sua amostra promovendo nível incomparável de completude dos dados.
Detectando analitos em baixas concentrações, mesmo em amostras complexas
Quanto mais complexa é sua amostra, mais difícil para o equipamento indentificar e quantificar analitos em baixas concentrações. Aquisição SWATH em conjunto com tecnologia do equipamentos TripleTOF permite que você veja tudo, seja em altas ou em baixas concentrações.
Detectando compostos em baixas concentrações em matrizes complexas é desafiador mesmo para os mais poderoso analisador de massas. Interferentes em espectros de massas podem causar dificuldades em detector baixos limites de detecção dos analitos mesmo em sistemas de alta resolução. Também, compostos em altas concentrações ocupam boa parte do tempo de ciclo do espectrômetro de massas, assim o MS/MS é acionado tipicamente coleta dados de espectros de íons mais intensos, deixando de realizar esta aquisição para íons de baixa intensidade e estes íons geralmente tendem a ser o composto de interesse. Tem uma larga faixa dinâmica pode ajudar, mas mesmo assim não é suficiente.
Para resolver isso, é necessária inter-relação na aquisição de dados: controle de janela de aquisição em Q1 e resolução de aquisição MS/MS em alta velocidade.
Principais Critérios de Aquisição 1. Janela de Aquisição Variada
A tecnologia patenteada SWATH da SCIEX consta com a opção de Janela de Aquisição Variada. Sistema que controla o tamanho da janela de aquisição de Q1, permitindo que você utilize janelas menores de m/z para regiões da faixa com maior concentração de íons da sua amostra (ou seja, onde você espera que tenha um maior número de compostos). O resultado é um aumento da especificidade pois você obterá informações mais detalhadas sobre sua amostra, reduzindo o risco de perder picos de baixa abundância em matrizes complexas.
Pense em análises de proteômica como exempl –
muitos peptídeos estão na faixa de massa d 500-800 m/z. Com a Janela de Aquisição Variada, você pode utilizar janelas menores de Q1 no SWATH nessa faixa de massa, proporcionando uma cobertura maior de picos nessa região e, em seguida, usando janelas mais amplas no restante da faixa de massa. No geral, essa estratégia oferece uma cobertura abrangente dos analitos e adicionalmente melhora a detecção de compostos de menor abundância em sua amostra.
Na Figura 1, as janelas de Q1 no SWATH para 25 Da de largura fixa a 80 ms de varredura totalizam 32 janelas de aquisição, se ajustarmos esse valor para 100 com largura variável de 25 ms de varredura cada, aproxidamente 120% mais proteínas podem ser quantificadas na amostra.
Principais Critérios de Aquisição 2. Resolução de MS/MS a Alta Velocidade
Como mencionado, amostras complexas podem ocupar um valioso tempo de aquisição de espectros de massas, que permite que o sistema tenha apenas tempo suficiente para adquirirr informações de MS/MS dos analitos com sinal mais intenso na sua amostra, sejam elas importantes ou não e, ao utilizar estratégias de aquisição dependentes de dados, os picos detectados com baixa intensidade podem nem mesmo ter a coleta de espectros de MS/MS, o que é essencial para a identificação de compostos.
Com o sistemaTriple® 6600 e aquisição por SWAT® até 100 MS/MS por segundo podem ser adquiridos, sem sacrificar a resolução espectral, permitindo um número muito maior de janelas em Q1. Isso fornece não apenas melhor detecção de analitos pouco intensos, mas o mais importante, identificações e quantificações de mais compostos em cada amostra.
Na Figura-2, é mostrado 2 peptídeos co-eluídos. Com a aquisição por SWATH utilizando o sistema TripleTOF 6600, o composto de sinal pouco intenso (marcada na caixa laranja abaixo) pode ser facilmente detectado e quantificado mesmo na presença de peptídeos com sinais intensos.
Faça um arquivo digital completo da sua amostra logo na primeira análise
Pare de armazenar amostras e comece a armazenar dados. A aquisição por SWATH coleta a informação que você precisa em sua amostra de uma única vez. Isso se torna especialmente crítico quando o tempo é um fator determinante, e a reanálise não é uma opção, devido a fatores como quantidade da amostra limitada ou a amostra corre risco de degradação.
Como uma estratégia de aquisição independente de dados, a aquisição por SWATH coleta informações sobre MS e MS/MS de todos os íons detectáveis, deixando como opção o reprocessamento dos dados da sua amostra caso novas questões aparecam no futuro. Seu arquivo digital é sua fonte de segurança, permitindo que você processe novamente sua amostra sem ter que analisá-la novamente no seu espectrômetro de massas. Considere os dados adquiridos por SWATH como a impressão digital das suas amostras.
Quantifique seus analitos com confiança
Na busca de alta qualidade de informação, alta especificidade de quantificação com sensibilidade a nível MS/MS, ampla faixa dinâmica linear aliado e excepcional reprodutibilidade. A aquisição por SWATH juntamente com tecnologia SCIEX TripleTOF oferece em todos requisitos citados.
Muitas vezes, não é apenas o que está em nossa amostra que importa, e sim a quantidade que está presente, o que é fundamental para nos permitir tirar conclusões ou orientar decisões. A aquisição por SWATH é uma estratégia de aquisição independente de dados com potencial quantitativo como nenhuma outra. Fornecendo uma cobertura abrangente de quantificação usando dados de MS/MS de alta resolução (sobre MS) para averiguar a reprodutibilidade da sua amostra, o SWATH pode fornecer resultados quantitativos sólidos que irão avançar sua pesquisa, aproximando-se do padrão de ouro da quantificação por MRM.
Explore como o SWATH está sendo aproveitado nestas áreas de aplicação principais.
Gaste mais tempo na biologia e menos tempo na tecnologia.
- Dr. Robert Moritz, ISB
Desenvolvendo métodos menos laboriosos
Pare de gastar horas ou dias desenvolvendo métodos para executar suas amostras e experimentos. A aquisição por SWATH utiliza configurações básicas de aquisição, exigindo pouco ou nenhum desenvolvimento de método, de modo que seu tempo e recursos são gastos apenas na obtenção de dados e resultados.
Desenvolver e otimizar os métodos de aquisição e quantificação de seus analitos de interesse pode consumir muito tempo do seu trabalho que poderia ser usado na análise de suas amostras e a obtenção de novos e importantes resultados. Com parâmetros mínimos para configurar e ajustar, o SWATH fornece uma estratégia de aquisição única que produz dados quantitativos de altíssima qualidade, sem a necessidade de gastar horas de otimização laboriosa do seu método.
Como a aquisição SWATH é diferente? Uma análise típica por MRM, por exemplo, exige que você otimize seu método antecipadamente para selecionar os compostos ou as transições de MRM que deseja detectar.
Com a aquisição por SWATH, um único método genérico de aquisição de dados é usado o tempo todo. Isso significa que você seleciona seus compostos de interesse nos dados obtidos APÓS a coleta abrangente de espectros de MS e MS/MS da sua amostra.
Mas o mais importante é que, caso na análise de seus dados apareça novas perguntas, você pode simplesmente reexaminar os dados que já coletou, em vez de atualizar seu método de aquisição e analisar novamente sua amostra da primeira etapa.
