iTRAQ 시약

연구 목적으로만 사용할 수 있습니다. 진단 절차에는 사용할 수 없습니다.

iTRAQ 시약은 최초의 다중화된 아민 특이적인 안정 동위원소 시약 세트로, 중요한 PTM 정보를 유지하면서 상대적 및 절대적으로 동시에 동정 및 정량 분석할 수 있도록 서로 다른 생물학적 시료(최대 8개까지) 내 모든 펩타이드를 표지 처리할 수 있습니다. iTRAQ 시약 킷에는 4플렉스 및 8플렉스 등 두 가지 유형이 있습니다. 더욱 경제적인 벌크 팩으로 iTRAQ 시약 - 8플렉스도 제공됩니다.

  • 다중 시료에서 단백질을 동시에 동정 및 정량화
  • PTM(post-translational modification)을 포함하여 모든 펩타이드를 표지 처리하여 단백질 및 단백질체 대상 범위 확장
  • 단백질 한 개마다 펩타이드 여러 개를 태그 처리하여 MS/MS 스펙트럼에서 자신 있게 동정 및 정량 분석 수행
  • 처리량이 증가하여 자신 있게 단백질 바이오마커 발굴 연구 수행
  • 복잡성이 줄어든 시료를 분리할 필요가 없는 간단한 워크플로우 제공(예: 친화성 풀다운(affinity pull-down)).
  • 한 번의 실험에서 서로 다른 생물학적 시료를 최대 8개까지 분석하도록 다중화에 대한 유연성 제공
  • 모든 SCIEX 단백질체학 LC/MS/MS 플랫폼에서 ProteinPilot™ 소프트웨어로 완벽하게 지원

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개요

펩타이드 태그 처리 케미스트리의 혁신

iTRAQ® 시약은 동위원소 펩타이드 태그 처리 기술로, 펩타이드 클래스에 관계없이 모든 일차 아민을 표지 처리할 수 있습니다. PTM(post-translational modification)과 같은 중요 정보가 보존되므로, 이 태깅 시스템을 사용하면 시료에서 더욱 상세한 정보를 확인할 수 있습니다.

Figure 1: iTRAQ® Reagent - 8plex protein quantitation.

고처리량 단백질 바이오마커 발굴

고처리량 바이오마커 발굴의 경우 시료(최대 8개까지)에서 동시에 단백질을 동정 및 정량 분석할 수 있습니다. 간소화된 iTRAQ® 시약 워크플로우는 비표지 처리 분석법에 비해 크로마토그래피 요구 사항이 엄격하지 않고 신뢰도가 높은 결과를 제공합니다. 그리고 표지 처리할 필요가 없는 프로파일링 분석법과 달리 iTRAQ® 시약은 분리 전략과 완벽하게 호환되므로, 저농도 단백질을 "보다 심도 있게" 평가할 수 있습니다.

실험 유연성과 신뢰할 수 있는 동정

실험 설계 유연성이 더욱 강화되어 서로 다른 시료를 최대 8개까지 동시에 분석할 수 있습니다. 다중화로 수많은 시료 상태를 비교하고 유연성을 통해 실험을 이중 및 삼중으로 실행할 수 있습니다. 신호가 증가하여 iTRAQ® 시약 - 8플렉스로 표지 처리한 펩타이드의 MS/MS 조각 결과가 더욱 명확해지고 펩타이드 동정 결과의 신뢰도가 더욱 높아집니다. 단백질 한 개마다 펩타이드 여러 개를 태그 처리 및 분석하여 단백질 동정을 더욱 강화합니다.

Figure 2: iTRAQ® Reagents - 8plex protein identification.

정량 생물학 솔루션

상대적 또는 절대적 정량 분석 수행 여부와 관계없이 iTRAQ® 시약 - 8플렉스, MS 장비 및 애플리케이션 소프트웨어는 간편한 통합 솔루션과 유연성을 제공하면서 정량 생물학에 필요한 단백질 정량 분석 및 동정에 자신감을 더해 줍니다. 이러한 시약은 풀다운(pull-down), 막단백질 연구, 바이오마커 결정의 발굴과 밸리데이션 분석, 관심 있는 표적 단백질의 절대 정량 분석을 포함한 수많은 응용 분야에 적합합니다. 시약은 대부분의 질량 분석기와 호환되지만 SCIEX 장비에 최적화되어 있습니다.

Kits

 

Part Number

Kit Name/Description

4352135 iTRAQ Reagents Multiplex Kit
iTRAQ 시약 114, 115, 116, 117(4플렉스) 및 2플렉스 분석법 10회, 3플렉스 분석법 6회 또는 4플렉스 분석법 5회를 수행할 수 있는 버퍼와 시약이 들어 있습니다. 10팩 트립신은 별매품입니다. 시약 튜브 1개마다 단백질 소화물을 최대 100 ug까지 표지 처리할 수 있습니다. (참고: 혈장 및 혈청에 단백질 소화물 50 ug을 사용하는 것이 좋습니다.)
4352157 Trypsin, TPCK treated, 10-팩
리신 및 아르기닌 잔류물의 카르복실(carboxyl) 측에서 특이적으로 펩타이드 결합체를 가수분해하는 변형된(TPCK 처리된) 세린 단백분해효소(serine protease)입니다. 소화의 일관성이 향상되도록 염화칼슘이 들어 있습니다. 변형된 트립신은 N-토실-L-페닐알라닌 클로로메틸 케톤(N-tosyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone, TPCK)으로 처리되어 관련 없는 키모트립신 분해 활동을 비활성합니다. 각 패키지에는 바이얼마다 25 µg이 들어 있는 바이얼 10병이 있어 시료 100 ug을 사용할 때 2플렉스 분석법 12회, 3플렉스 분석법 8회 또는 4플렉스 분석법 6회를 수행할 수 있습니다. 혈청/혈장 실험의 경우 시료 한 개마다 단백질 50 ug을 표지 처리하는 것이 좋습니다. 따라서 트립신이 절반만 필요합니다.
4352160 iTRAQ Reagents Methods Development Kit
분리 분석을 최대 3회까지 수행할 수 있도록 우수한 효소 소화와 펩타이드 표지 처리 프로토콜을 개발하는 데 필요한 iTRAQ 시약 114, 117, 테스트 시료, 버퍼 및 시약이 들어 있습니다. 개별 시약마다 단백질 소화물을 최대 100 ug까지 표지 처리할 수 있습니다. 다음이 들어 있습니다. 스타터 킷 - 하드웨어, 양이온 교환 버퍼 팩 및 양이온 교환 카트리지, 프로토콜, iTRAQ 시약 킷. 오프라인 시료 전처리의 경우 이와 함께 4326688, 4326690 및 4326689도 주문하십시오. SCIEX에서는 주사기 또는 튜브를 제공하지 않습니다.
4369561 iTRAQ Reagents 3-Assay Duplex Trial Kit
iTRAQ 시약 114 및 117과 우수한 프로토콜을 개발하고 시료 전처리 프로토콜이 표지 처리와 소화를 간섭하지 않는지 확인할 수 있는 충분한 양의 자재가 들어 있습니다. 킷에는 시약, 반응 용액 및 검사 혼합물이 들어 있습니다. 카트리지(부품 번호: 4326695) 및 양이온 교환 버퍼(부품 번호: 4326747)를 별도로 구매해야 합니다.
4370280 iTRAQ Reagents Application Kit-Plasma
시료당 단백질 50 ug을 기준으로 2플렉스 실험 8회 또는 4플렉스 실험 4회를 수행할 수 있는 충분한 양의 반응 용액과 iTRAQ 시약 114, 115, 116 및 117이 들어 있습니다.
4370285 Trypsin, TPCK treated, 8-팩
리신 및 아르기닌 잔류물의 카르복실(carboxyl) 측에서 특이적으로 펩타이드 결합체를 가수분해하는 변형된(TPCK 처리된) 세린 단백분해효소(serine protease)입니다. 변형된 트립신은 N-토실-L-페닐알라닌 클로로메틸 케톤(N-tosyl-L-phenylalanine chloromethyl ketone, TPCK)으로 처리되어 관련 없는 키모트립신 분해 활동을 비활성합니다. 각 패키지에는 바이얼마다 25 µg이 들어 있는 바이얼 8병이 있어 시료 100 ug을 사용할 때 2플렉스 분석법 10회, 3플렉스 분석법 6회 또는 4플렉스 분석법 5회를 수행할 수 있습니다. 혈청/혈장 실험의 경우 시료 한 개마다 단백질 50 ug을 표지 처리하는 것이 좋습니다. 따라서 트립신이 절반만 필요합니다. 참고: 염화칼슘을 포함하지 마십시오.
4374321 iTRAQ 시약 애플리케이션 킷-단백질
시료당 단백질 25 ug을 기준으로 2플렉스 실험 10회 3플렉스 실험 6회 또는 4플렉스 실험 5회를 표지 처리할 수 있는 충분한 양의 반응 용액, 검사 혼합물, iTRAQ 시약 114, 115, 116 및 117(단백질 25 ug용)이 들어 있습니다.
4381664 iTRAQ Reagent- Multiplex Buffer Kit
SDS - 변성, TCEP 환원 시약, MMTS 시스테인 차단 시약, TEAB 버퍼 및 이소프로판올(Isopropanol)이 들어 있습니다. 다중화 킷 2개에 충분한 양입니다.
4390811 iTRAQ Reagent-8Plex One Assay Kit
iTRAQ 시약 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 및 121과 우수한 프로토콜을 개발하고 시료 전처리 절차가 표지 처리와 소화를 간섭하지 않는지 확인할 수 있는 충분한 양의 자재가 들어 있습니다. 또한 SDS - 변성, TCEP 환원 시약, MMTS 시스테인 차단 시약, TEAB 버퍼 및 이소프로판올(Isopropanol)이 들어 있습니다.
4390812 iTRAQ Reagent-8Plex Multiplex Kit
iTRAQ 시약 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 및 121과 8플렉스 분석법을 5회 수행할 수 있는 충분한 양의 자재가 들어 있습니다. 시약 튜브 1개마다 단백질 소화물을 최대 100 ug까지 표지 처리할 수 있습니다. (참고: 혈장 및 혈청에 단백질 소화물 50 ug을 사용하는 것이 좋습니다.) 다중화 버퍼 킷(부품 번호 4381664)은 별매품입니다.
4393528 iTRAQ Reagent - 8Plex 25 U bulk pack
튜브마다 8플렉스 시약이 25개씩 있는 튜브 8개가 들어 있습니다.
4393529 iTRAQ Reagent - 8Plex 50 U bulk pack
튜브마다 8플렉스 시약이 50개씩 있는 튜브 8개가 들어 있습니다.
4466096 iTRAQ Reagent - Multiplex 25 U bulk pack
튜브마다 4플렉스 시약이 25개씩 있는 튜브 4개가 들어 있습니다.
4326688 카트리지 홀더(별매품)
양이온 교환 카트리지와 아비딘(avidin) 친화성 카트리지를 작동하기 위한 카트리지 홀더입니다.
4326690 출구 커넥터
수동으로 양이온을 교환하는 데 사용되는 출구 튜브입니다.
4326689 니들포트 어댑터(별매품)
수동으로 양이온을 교환하는 데 사용됩니다.
4326695 양이온 교환(5팩)
0.2 ml 양이온 교환 카트리지 5개가 있는 패키지입니다. 카트리지는 카트리지 홀더(별매품)와 함께 작동합니다.

FAQs

벌크에서 iTRAQ가 제공됩니까?
예. 벌크 시약은 iTRAQ 시약 25개 킷 및 50개 킷에서만 제공됩니다. 대략 10개당 버퍼 킷 1개가 필요합니다.

4플렉스 iTRAQ와 8플렉스 iTRAQ 간의 배양 시간에 큰 차이가 있는 이유는 무엇입니까?
iTRAQ 8플렉스는 4플렉스와 다른 분자이므로, 반응 시간이 더 깁니다(120분/60분).

4플렉스의 114~117과 8플렉스의 114~117이 동일합니까?
아니요. 4플렉스와 8플렉스는 서로 다른 시약이며 동위원소 실험에 혼합해서는 안 됩니다.


iTRAQ 사용 후 표적 펩타이드의 전하 상태 분포가 다른 이유는 무엇입니까?최종 pH가 다르므로 2+ 및 3+ 전하 상태 간에 차이가 나타날 수 있습니다. 일반적으로 더 많은 2+ 이온으로 이동하면 아세트산 암모늄 5 mM을 사용하여 pH를 4.0으로 조정할 수 있습니다.

바이얼을 개봉한 후 iTRAQ 시약을 다시 사용할 수 있습니까?
아니요. iTRAQ 시약의 각 바이얼은 충진되어 불활성 가스로 밀봉되어 있습니다. 시약이 수분에 노출되면 성능이 쉽게 저하되어 이후 표지 처리 효율이 나빠집니다. 벌크 시약 킷의 경우 분취 및 보관을 위한 특별 프로토콜이 있습니다.

iTRAQ 용액 색상이 다르게 보입니다. 괜찮습니까?
문제 없습니다. iTRAQ 시약 색상은 미량의 금속부터 수분까지 다양한 요인에 따라 약간씩 변할 수 있습니다. 일반적으로 시약 성능은 이에 영향을 받지 않습니다.

표지 처리할 수 있는 단백질 양은 얼마입니까?
8플렉스 시약의 바이얼마다 iTRAQ 시약 2 µmol이 들어 있습니다. 이는 일반적으로 단백질 소화물 20~100 µg을 표지 처리할 수 있는 양입니다. 펩타이드가 아닌 일차 아민 화합물이 다양하게 있는 혈장 및 혈청 시료의 경우 프로토콜을 조정해야 할 수도 있습니다. 중요한 요인으로는 버퍼링(pH 7.5~8.5), 버퍼 농도(90~100 mM), iTRAQ 시약 농도(40 mM에서 ±5%) 및 총 유기 농도(65% 이상)가 있습니다.

표지 처리 후 얼마 동안 시료를 보관할 수 있습니까?
시료를 즉시 분석하려는 경우에만 표지 처리하는 것이 좋습니다. 표지 처리된 시료를 2주 이상 보관하지 마십시오.